Einleitung: Historie, Klinik Aspekte, Pathomechanismen, zelluläre Immunität – Überempfindlichkeit vom Soforttyp: IgE, Rezeptoren für IgE (FceRI, FceRII, CD23), Mastzellen, baso-, eosino- und neutrophile Granulozyten, Thrombozyten, Mediatoren der allergischen Entzündung, Leukotriene, Histamin, mikrobielle Hautbesiedlung, Haut als Abwehrorgan, normale und aerobe bakterielle Hautflora, S. aureus, S.-aureus-Enterotoxine, Zielsetzung.
Material und Methoden: Verwendete Chemikalien, Reagentien, Lösungsmittel – Puffer – Blutspenderkollektive – Präparation von Zellen aus humanem Vollblut – Periphere Blutlymphozyten – Monozyten – B- und T-Zellen – Basophilen Granulozyten – Zellzählung, -differenzierung – Laktatdehydrogenase – Pappenheim-Färbung – Zellkulturbedingungen, -medien – Puffer zur Inkubation von basophilen Granulozyten – Stimuli – Stimulation von Lymphozyten mit S. aureus, S.-aureus-Enterotoxinen und monoklonalen Antikörpern – Priming von Basophilen und Neutrophilen mit Interleukinen – Stimulationsbedingungen – ELISA – Proteinbestimmungen nach Lowry und nach Bradford – Gelelektrophoretische Verfahren – Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS/PAGE) – Coomassie- Färbung von SDS-Polyacrylamidgelen – Western-Blot – Inkubation der Immunoblots – SEB – Aminosäuresequenz. Immunologische Methoden: Zellproliferation – Markierung von Antikörpern – IgE-ELISA – Niedrigaffiner Rezeptor für IgE (CD23) – Zytokin-ELISA – S.-aureus-Enterotoxine – Durchflußzytometrie – Hautbiopsien und Immunfluoreszenz-Histologie – Molekularbiologische Verfahren – Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) – HLA-Klasse-II-Typisierung – Statistik.
Ergebnisse: S. aureus – Einfluß von hitzeinaktivierten S. aureus in der Ko-Kultur auf: IgA-, IgG-, IgE-Synthese, CD23-Expression – S.-aureus-Enterotoxine – Reinheit des verwendeten SEB – Zytokinproduktion und SEB – Zytokin-mRNA-Expression – IgE-Synthese – FACS-Analyse – T-Zell-Subpopulationen – Expression von Vb-Ketten auf CD4+-T-Zellen, CD8+-T-Zellen, CD45RA+-T-Zellen, CD45RO+-T-Zellen – CD4/CD8-Verhältnis – Expression von Vb-Ketten – HLA-Klasse-II-Typisierung – Stimulation, Proliferation und IFNg- bzw. IL-5-Sekretion peripherer Blutlymphozyten mit anti-Vb-Antikörpern – Stimulation von Basophilen mit S.-aureus-Enterotoxinen (Histaminausschüttung) – LTC4-Generierung – Serum-IgE-Antikörper und Histaminausschüttung – “primings” mit IL-3, IL-8 und GM-CSF und Histamin- bzw. LTC4-Ausschüttung – Identifikation der IgE-Bindungsstelle am SEB-Molekül – Immunoblot zum Nachweis spezifischer IgE-Antikörper – Spaltung von SEB mit Trypsin – Sequenzierung des IgE-bindenden Spaltprodukts – Datenbankanalyse auf Homologie.
Diskussion: S. aureus und atopisches Ekzem – Immunglobulinsynthese und CD23-Expression nach Stimulation mit S. aureus – Einflüsse von S.-aureus-Enterotoxin B auf die Immunregulation beim atopischen Ekzem – S.-aureus-Enterotoxin-induzierte Histamin- und LTC4-Ausschüttung – Sequenzierung der IgE-bindenden Aminosäuresequenz des SEB-Moleküls – Schlußfolgerungen – Ausblick.

Einleitung: Historie, Klinik Aspekte, Pathomechanismen, zelluläre Immunität – Überempfindlichkeit vom Soforttyp: IgE, Rezeptoren für IgE (FceRI, FceRII, CD23), Mastzellen, baso-, eosino- und neutrophile Granulozyten, Thrombozyten, Mediatoren der allergischen Entzündung, Leukotriene, Histamin, mikrobielle Hautbesiedlung, Haut als Abwehrorgan, normale und aerobe bakterielle Hautflora, S. aureus, S.-aureus-Enterotoxine, Zielsetzung.
Material und Methoden: Verwendete Chemikalien, Reagentien, Lösungsmittel – Puffer – Blutspenderkollektive – Präparation von Zellen aus humanem Vollblut – Periphere Blutlymphozyten – Monozyten – B- und T-Zellen – Basophilen Granulozyten – Zellzählung, -differenzierung – Laktatdehydrogenase – Pappenheim-Färbung – Zellkulturbedingungen, -medien – Puffer zur Inkubation von basophilen Granulozyten – Stimuli – Stimulation von Lymphozyten mit S. aureus, S.-aureus-Enterotoxinen und monoklonalen Antikörpern – Priming von Basophilen und Neutrophilen mit Interleukinen – Stimulationsbedingungen – ELISA – Proteinbestimmungen nach Lowry und nach Bradford – Gelelektrophoretische Verfahren – Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS/PAGE) – Coomassie- Färbung von SDS-Polyacrylamidgelen – Western-Blot – Inkubation der Immunoblots – SEB – Aminosäuresequenz. Immunologische Methoden: Zellproliferation – Markierung von Antikörpern – IgE-ELISA – Niedrigaffiner Rezeptor für IgE (CD23) – Zytokin-ELISA – S.-aureus-Enterotoxine – Durchflußzytometrie – Hautbiopsien und Immunfluoreszenz-Histologie – Molekularbiologische Verfahren – Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) – HLA-Klasse-II-Typisierung – Statistik.
Ergebnisse: S. aureus – Einfluß von hitzeinaktivierten S. aureus in der Ko-Kultur auf: IgA-, IgG-, IgE-Synthese, CD23-Expression – S.-aureus-Enterotoxine – Reinheit des verwendeten SEB – Zytokinproduktion und SEB – Zytokin-mRNA-Expression – IgE-Synthese – FACS-Analyse – T-Zell-Subpopulationen – Expression von Vb-Ketten auf CD4+-T-Zellen, CD8+-T-Zellen, CD45RA+-T-Zellen, CD45RO+-T-Zellen – CD4/CD8-Verhältnis – Expression von Vb-Ketten – HLA-Klasse-II-Typisierung – Stimulation, Proliferation und IFNg- bzw. IL-5-Sekretion peripherer Blutlymphozyten mit anti-Vb-Antikörpern – Stimulation von Basophilen mit S.-aureus-Enterotoxinen (Histaminausschüttung) – LTC4-Generierung – Serum-IgE-Antikörper und Histaminausschüttung – “primings” mit IL-3, IL-8 und GM-CSF und Histamin- bzw. LTC4-Ausschüttung – Identifikation der IgE-Bindungsstelle am SEB-Molekül – Immunoblot zum Nachweis spezifischer IgE-Antikörper – Spaltung von SEB mit Trypsin – Sequenzierung des IgE-bindenden Spaltprodukts – Datenbankanalyse auf Homologie.
Diskussion: S. aureus und atopisches Ekzem – Immunglobulinsynthese und CD23-Expression nach Stimulation mit S. aureus – Einflüsse von S.-aureus-Enterotoxin B auf die Immunregulation beim atopischen Ekzem – S.-aureus-Enterotoxin-induzierte Histamin- und LTC4-Ausschüttung – Sequenzierung der IgE-bindenden Aminosäuresequenz des SEB-Moleküls – Schlußfolgerungen – Ausblick.